Згідно з рекомендацією ВООЗ, сперму для штучного запліднення отримують шляхом мастурбації після 2-7 днів статевої стриманості. При олігоспермії більшу кількість сперматозоїдів можна отримати, збільшивши період утримання та / або зібравши кілька еякулятів.
Іноді в силу психологічної блокади сперму шляхом мастурбації отримати не вдається. У таких випадках можна використовувати еякулят з кондому (при природному статевому акті), якщо тільки він не покритий сперміцидну речовиною. Про дослідженні сперми читайте тут .
При еректильної дисфункції, пов'язаної з ураженням сегментів ThXI-LII спинного мозку, еякуляцію можна викликати за допомогою вібрації або електричного роздратування.
Ці процедури ефективні у 90% пацієнтів. У решти сперматозоїди можна отримати шляхом при аспірації з поздовжньогорозрізу сім'явивідної протоки після надрізу мошонки.
При імунологічному чоловічому безплідді або у пацієнтів з в'язкою спермою доводиться використовувати спеціальні маніпуляції. Підготовку сперматозоїдів полегшує виділення сперми в 2 мл збалансованого середовища, що зменшує не тільки ступінь аглютинації клітин, але і зв'язування антитіл з їх поверхнею в процесі розрідження сперми.
У деяких випадках склеившиеся сперматозоїди можна розділити за допомогою протеолітичних ферментів (хімотрипсину , трипсину або папаина).
двадцятихвилинна присутність цих ферментів в суспензії сперматозоїдів в безальбуміновой середовищі не пошкоджує клітин, але перед інсемінацією сперматозоїди необхідно відмити, щоб ферменти не завадили взаємодії гамет.
У пацієнтів з ретроградної еякуляцією сперматозоїди для штучного запліднення можна отримувати трьома різними способами.
За допомогою специфічних засобів , таких, як альфа -адренергічні (фенилпропаноламин, окседрін) або антихолінергічні речовини (бромфенірамін) можна домогтися антеградной еякуляції.
Сперматозоїди зі свіжого еякуляту можна витягти за допомогою катетера з сечового міхура. Для захисту сперматозоїдів від дії сечі з її кислою реакцією і високою осмолярністю перед еякуляцією слід спустошити міхур і промити його 10 мл середовища, а сечу подщелочив прийомом великої дози соди (1-4 г).
Третій спосіб полягає в аспірації рухливих сперматозоїдів з поздовжньогорозрізу сім'явивідної протоки.
При обструктивної азооспермії сперматозоїди беруть в капіляр з протоки придатка яєчка ( « мікрохірургічну епідідімальная аспірація сперматозоїдів «, MESA).
Відразу виявити рухливі клітини зазвичай не вдається, доводиться виробляти кілька надрізів придатка, починаючи з дистального відділу його хвоста. У більшості випадків тривалої обструктивної азооспермії рухливі сперматозоїди виявляються не в хвості, а в більш проксимальної частини придатка. Кількість сперматозоїдів, одержуваних таким чином, по-різному, але на частку рухомих клітин зазвичай припадає менше 20%. Цю трудомістку процедуру можна робити за день до отримання яйцеклітин.
В даний час вважають за краще отримувати сперматозоїди з самого яєчка, а не з його придатка, оскільки це займає набагато менше часу і обходиться дешевше. Результати гель-електрофорезу показують, що ДНК сперматозоїдів з яєчок стабільніша, ніж ДНК клітин з придатків, але порівняння обох методів в проспективних клінічних дослідженнях поки не проводилося.
Сперматозоїди для ІКСІ також можна отримувати не тільки з сім'явиносних проток і придатків, а й з самих яєчок ( « тестикулярная екстракція сперматозоїдів «, TESE). Щоб знайти придатні для ІКСІ життєздатні клітини, доводитися брати від одного (при обструктивної азооспермії) до дев'яти (при гіпергонадотропной азооспермії) проб тканини. Вогнища сперматогенезу можуть зберігатися в окремих насінних канальцях, навіть при вираженій атрофії яєчок з різким підвищенням рівня ФСГ в сироватці.
Життєздатні сперматозоїди ідентифікують по їх рухливості в поле інвертованого мікроскопа при 200-400-кратному збільшенні і виділяють з тканини за допомогою микропипетки. Щоб екстрагувати з сполучної тканини один життєздатний сперматозоїд, біоптат подрібнюють механічно або обробляють ферментами (колагеназою і трипсином). Біопсію і обробку тканини краще проводити за день до отримання яйцеклітин, залишаючи її на ніч в культурі. Запліднення, імплантація і навіть вагітність відбуваються значно частіше, якщо до культури тканини яєчок додають 25 МО / л рекомбінантного ФСГ. Іноді в подрібненому биоптате яєчка важко виявити окремий сперматозоїд, тому недавно був запропонований альтернативний метод — виділення зародкових клітин із заморожених і талих біоптатів яєчка, оброблених колагеназою .
Пацієнтів необхідно попередити, що в 40 -50% випадків сперматозоїди в біоптатах не виявляються. Імовірність присутності життєздатних клітин легко передбачити на підставі результатів детального гістологічного дослідження біоптатів. Щоб уникнути непотрібної стимуляції яєчників у жінки перед отриманням яйцеклітин, розроблений метод кріо-TESE.
При цьому кілька біопсій обох яєчок виробляють до будь-якого втручання в організм жінки. По одному БІОПТАТ кожного яєчка досліджують гістологічно, відзначаючи присутність або відсутність сперматозоїдів. Два биоптата обробляють механічно або ферментативно, а решта заморожують.
Під час гістологічного дослідження сперматозоїди вдається знайти в 76,9% біоптатів. Прогноз присутності сперматозоїдів в заморожених і талих биоптатах (заснований на виявленні вогнищ активного сперматогенезу в окремих канальцях), виявляється помилковим тільки в 2,9% випадків. У 0,7% всіх біоптатів знаходили рак яєчка або карциному in situ .
Частота запліднення, імплантації і вагітності при ІКСІ не залежить від того, чи використовуються для отримання сперматозоїдів свіжі або кріоконсервовані біоптати .
Описано також методи отримання сперматозоїдів шляхом простої чрескожной пункції епідідімального протоки ( « чрескожная епідідімальная аспірація сперматозоїдів «) або самих яєчок ( « тонкоигольная тестикулярная аспірація сперматозоїдів «) з наступною аспірацією клітин шприцом. Ці процедури проводяться швидко і не вимагають дорогого обладнання, необхідного для MESA або TESE.
Шляхом біоп придатків яєчок і яєчок або зазвичай вдається витягти менше сперматозоїдів, ніж за допомогою більш інвазивних прийомів. Проспективні рандомізовані дослідження, в яких порівнювалася б клінічна ефективність запропонованих методів, в даний час відсутні.
